Testowanie retrowirusów

Metody wykrywania

Zasady metody

Fokus regulacyjny

Test kokultywacji

Metoda ta wykorzystuje wrażliwe komórki wskaźnikowe do wychwytywania zakaźnych cząstek wirusa i określa stan skażenia poprzez obserwację takich zjawisk, jak efekty cytopatyczne, tworzenie ognisk lub specyficzna ekspresja antygenu. Może wykazać obecność zakaźnych cząstek retrowirusowych.

• Obowiązkowe cele testowania: komórki EOPC lub komórki produkcyjne-o ograniczonym pasażu.

• Podstawowa procedura testowa: należy zastosować dwu-etapowy-system współhodowli (faza amplifikacji wirusa i faza wskaźnika aktywności).

• Wymagania dotyczące wrażliwych komórek: W zależności od gatunku i pochodzenia testowanych komórek, do testów zakaźności retrowirusów należy zastosować różne lub wiele wrażliwych linii komórkowych.

• Wymagania dotyczące pasażowania kultur: system współ-hodowli należy pasażować co najmniej 5 razy (zwykle więcej), aby zapewnić odpowiednią amplifikację potencjalnego wirusa.

Transmisyjna mikroskopia elektronowa

Metoda ta wykorzystuje-transmisyjną mikroskopię elektronową o wysokiej rozdzielczości do bezpośredniej obserwacji morfologii i struktury cząstek wirusa (takich jak typowa struktura otoczki dwudziestościennej i morfologia nukleokapsydu), umożliwiając identyfikację wizualną i analizę ilościową. Może wykrywać znane i nieznane cząstki wirusa, w tym cząstki-niereplikujące lub te, które nie zostały wychwycone w testach zakaźności.

• Obowiązkowe cele testowania: komórki EOPC lub komórki produkcyjne-o ograniczonym pasażu.

• Podstawowy wymóg: należy określić rodzaj i ilość cząstek retrowirusa.

• Wymagania dotyczące próbek: wymagane są ultracienkie skrawki, zazwyczaj wymagające systematycznej obserwacji co najmniej 200 komórek.

• Przepisy szczególne (Farmakopea Chińska 2025): W przypadku niektórych komórek gryzoni (np. CHO, BHK-21) lub komórek owadów należy również określić ilość cząstek wirusa w płynie pobranym i ich zakaźność.

Test odwrotnej transkryptazy

W oparciu o charakterystykę odwrotnej transkryptazy katalizującej syntezę DNA z matrycy RNA, obecność retrowirusów można pośrednio określić poprzez wykrywanie sygnałów radioaktywnych lub fluorescencyjnych produktów reakcji w celu ilościowego określenia aktywności enzymu. Metoda ta jest niezależna od zakaźności wirusa i pozwala na szerokie badanie przesiewowe pod kątem cząstek wirusa o aktywności enzymatycznej.

• Wyjaśnienie zwolnienia: Zarówno ICH Q5A(R2), jak i Farmakopea Chińska (wydanie 2025) wyraźnie stwierdzają, że ten test nie jest wymagany w przypadku komórek, o których wiadomo, że wytwarzają retrowirusy (takich jak niektóre komórki gryzoni, owadów i ptaków).

• Wymagania alternatywne: W przypadku zwolnienia należy przeprowadzić bardziej kompleksowy test na typ, ilość i zakaźność cząstek wirusa.

PCR lub inne specyficzne metody in vitro

W zależności od specyficzności gatunkowej komórek, gdy wyniki aktywności odwrotnej transkryptazy są niejasne lub nie można ich zmierzyć, można zastosować-specyficzne gatunkowo metody wykrywania retrowirusów, takie jak retrowirusowa PCR, immunofluorescencja, ELISA itp. Ilościowa PCR retrowirusów może być również stosowana do ilościowego oznaczania cząstek retrowirusów.

• Pozycjonowanie podstawowe: Zwykle używane jako ważne uzupełnienie podstawowych metod wymienionych powyżej i narzędzie do potwierdzania specyficzności.

• Scenariusze zastosowań: powszechnie stosowane do bardzo czułego wykrywania i oznaczania ilościowego określonych znanych wirusów (np. qPCR) lub do dostarczania dowodów na poziomie-molekularnym, gdy wyniki zakaźności/mikroskopii elektronowej są wątpliwe.

• Podstawa regulacyjna: jego zastosowanie wymaga dokładnej walidacji i musi być zgodne z odpowiednimi wytycznymi dotyczącymi walidacji określonych metod wykrywania na rynku docelowym (np. Farmakopea Chińska (wydanie 2025)).

Profesjonalne usługi

Kompleksowa ochrona dla Ciebie

Globalne podejście do zgodności

Nasze metody testowania są głęboko zintegrowane z podstawowymi wymaganiami ICH Q5A(R2), Farmakopei Chińskiej (2025), USP i EP, zapewniając{{3} kompleksową usługę obejmującą badania zakaźności, transmisyjną mikroskopię elektronową (TEM) i wykrywanie aktywności odwrotnej transkryptazy, skutecznie wspierając jednoczesne stosowanie w wielu regionach, w tym w Chinach, USA i Europie.

Szerokie-możliwości wykrywania w spektrum

Dysponujemy szeregiem czułych linii komórkowych i dojrzałymi metodami dla różnych scenariuszy ryzyka, które pozwalają skutecznie wykrywać docelowe patogeny, w tym retrowirusy mysie, retrowirusy tropizmowe i retrowirusy owadów, zapewniając szerokie spektrum i swoistość wykrywania.

Własna platforma do mikroskopii elektronowej

Posiadamy własny transmisyjny mikroskop elektronowy-o wysokiej rozdzielczości i profesjonalny zespół techniczny, który zapewnia kontrolę jakości w pętli zamkniętej w całym procesie, od przygotowania próbki po wydruk danych. Możemy również świadczyć szybkie usługi ilościowe w zakresie surowców (UPB), aby dokładnie wspierać dalszą weryfikację usuwania wirusów.

Kompleksowa walidacja metody

Wszystkie metody są wykonywane zgodnie ze standardami GMP/GLP, ściśle zgodnymi z Farmakopeą Chińską (wydanie 2025) i ICH Q2(R2) w celu kompleksowej walidacji specyficzności, granic wykrywalności itp. Zapewniamy pełny-cykl zarządzania projektami, od projektu protokołu po wsparcie aplikacji, zapewniając zgodność danych i niezawodność.

Ochrona integralności danych

Od otrzymania próbki i przeprowadzenia eksperymentu po wystawienie raportu — stworzyliśmy kompletny system jakości zgodny z zasadami GMP i ALCOA+. Dzięki profesjonalnemu, wielo-poziomowemu przeglądowi danych i solidnemu mechanizmowi kontroli odchyleń (CAPA) zasadniczo zapewniamy wysoką-jakość i możliwość audytu realizacji każdego projektu.